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三聚氰胺ELISA试剂盒

  • 产品价格:面议
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  • ***更新:2016-12-30 11:30:54
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三聚氰胺ELISA试剂盒详细说明

一、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的三聚氰胺和微孔条上预包被的偶联抗原竞争三聚氰胺抗体,加入酶标记物后,用底物显色,样本吸光值与其所含残留物三聚氰胺的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应三聚氰胺的含量。 ? 二、试剂盒检测限 试剂盒检测限:???????? 10 ng/mL ? 三、?试剂盒组成 1.预包被板:96T 2.标准品液:(1mL/瓶) 0 ng/mL、20 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL 3.酶标记物????????? 12 mL 4.抗体工作液???????  7 mL 5.底物缓冲液? ?????? 7 mL 6.底物液???????????  7 mL 7.终止液???????????  7 mL 8.20倍浓缩洗涤液??? 50 mL ? 四、样本处理 配制样品稀释液: 称取89.5 g Na2HPO4?12H2O ,蒸馏水定容至1000 mL。 ? 湿的宠物食品萃取方法(稀释100倍) 1.匀质样品到布丁状; 2.称取2 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并剧烈振荡; 3.超声萃取1 min,漩涡混合1 min,然后静止5 min,使样品分层; 4.5000 r/min室温离心5 min,用玻璃纤维滤纸过滤上清液,并将其收集于干净试管中; 5.用样品稀释液将滤液20倍稀释; 6.取50 μL进行实验。 ? 干的宠物食品萃取方法(稀释200倍) 1.均质干的宠物饲料样品; 2.称取1 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并剧烈振荡; 3.超声萃取1 min,漩涡混合1 min,然后静止5 min,使样品分层; 4.5000 r/min室温离心5 min,用玻璃纤维滤纸过滤上清液,并将萃取液收集于干净试管中; 6.用样品稀释液将滤液20倍稀释; 7.取50 μL进行实验。 ? ? 液态奶/乳饮料(稀释5倍) 1.? 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中,冷藏至4℃备用; 2.? 将1 mL液态奶或乳饮料样品置于离心机中,5000 g离心10 min(建议10℃低温离心),分离样品中脂肪; 3.? 弃上层脂肪,取0.2 mL离心后的脱脂液态奶或乳饮料试样于干净试管中; 4.? 加入0.8 mL样品稀释液于离心后的脱脂液态奶或乳饮料中,振荡混匀样品,取50 μL进行实验。 奶粉(稀释25倍) 1. 称取1 g奶粉样品于干净试管中; 2. 加入5 mL的45~50℃温水溶解奶粉并混匀后冷藏至4℃备用; 3. 取1 mL溶解好的奶粉试样于离心管中,5000 g离心10 min(建议10℃低温离心),弃上层脂肪,取0.2 mL试样于干净试管中; 4.加入0.8 mL样品稀释液于试管中,振荡混匀取50 μL进行实验。 酸奶:(稀释5倍) 1. 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中,将PH值调至6~8,冷藏至4℃备用; 2. 将1 mL样品置于离心机中,5000 g离心10 min(建议10℃低温离心),弃上层脂肪,取0.2 mL试样于干净试管中; 3. 加入0.8 mL样品稀释液于试管中,振荡混匀取50 μL进行实验。 初乳样品:(稀释1倍) 直接法:将样品4℃冷藏30 min后,4000 r/min离心15 min,弃去上层脂肪,取50 μL进行实验。 ? 五、操作步骤 1.将试剂盒从冷藏环境中取出,置于室温(20~26℃)下平衡30min以上,将需用的板条放入支架,按顺序编号; 2.洗液配制:将50 mL浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至1000 mL备用(或按需量稀释); 3.在标准品孔中加入50 μL标准品,样品孔加入50 μL待测样品,然后每孔加入50 μL抗体(加入标品和样品时无时间差的影响),轻拍混匀,37℃下孵育40 min; 4.倒出孔中的液体,用洗板机洗涤4~6遍;没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中,静置20 s,倒出孔中的液体,将微孔架倒置,在吸水纸上连续拍打3次以上,以保证完全除去孔中的液体,重复操作4~6遍; 5.加入酶标记物100 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min,取出重复洗板步骤; 6.显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后,置37℃ 环境中反应10 min; 7.测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡混匀.设定酶标仪于450 nm处,测定每孔OD 值,根据标准曲线计算样品浓度。 ? 六、 结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标,以三聚氰胺标准品浓度(ng/mL)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中三聚氰胺实际浓度。 ? 七、 注意事项 1.试剂及样本没有回到室温(20~26℃)会导致所有标准的OD值偏低; 2.洗板拍干后应立即进行下一步操作; 3.混合要均匀,洗板要彻底,否则会出现重复性不好的现象; 4.反应终止液为2 mol/L**,避免接触皮肤。 5.将不用的微孔板放进自封袋重新密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下; 6.不要使用过了有效日期的试剂盒,不要使用不同批号试剂盒中的试剂; 7.显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之,0浓度标准品的吸光度值小于0.6时,表示试剂可能变质; 8.该试剂盒比较好反应温度为37 ℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。 ? 八、储藏条件和保质期 储藏条件:试剂盒于2~8℃保存,不要冷冻。 保 质 期:该产品有效期为1年,生产日期见包装盒。

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