一、原理 ?? 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿、**、饲料中的沙丁胺醇，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免*化学反应的原理来进行的，样本中的沙丁胺醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗沙丁胺醇抗体，再加入酶标二抗，用TMB底物显色，样品中的沙丁胺醇含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出沙丁胺醇含量。 ? 二 、试剂盒技术指标 试剂盒灵敏度：0.1 ppb 检测下限 **样本（鸡肉/肝、猪肉/肝）? ???? 1.0 ppb 猪尿??????????????? ????????????? 0.1 ppb 交叉反应率 沙丁胺醇（Salbutamal）????????????? 100％? 克伦特罗（Clenbuterol ）??????????? ?10％? 莱克多巴胺（Ractopamine）???????? < 0.1％? 肾上腺素（Adrenalin）????????????? < 0.1％? 去甲肾上腺素（Noradrenalin）?????? < 0.1％? 异丙肾上腺素（Isoporterenol）?????? < 0.1％?? 样本回收率 **样本（鸡肉/肝、猪肉/肝）?????? 90±20％ 猪尿???????????????????????????? 100±20％ ? 三、试剂盒 组 成 1. 酶标板：??????????? 96T/8孔 2. 标准品液:：  0 ppb、0.1 ppb、0.4 ppb、1.6 ppb、6.4 ppb、25.6 ppb（1mL/瓶） 3. 抗体工作液????????? 1瓶（7 mL） 4. 酶标记物：????????? 1瓶（12 mL） 5. 底物缓冲液：??????? 1瓶（7 mL） 6. 底物液： ?????????? 1瓶（7 mL） 7. 终止液：??????????? 1瓶（7 mL） 8. 20倍浓缩洗涤液：? ? 1瓶（50 mL）????? 加蒸馏水稀释到1000 mL 9. 样品稀释液：??????? 1瓶（12 mL）????? 用于稀释尿样 ? 四. 样品处理 尿样：（稀释倍数为2） 先加入25μL样品稀释液，再加入25μL尿样到微孔板中，混合均匀。浑浊尿样以4000 rpm离心5 min，取上清（清亮部分）。 猪肝、猪肉等** ??前处理配制的溶液 配液1：0.5M盐酸溶液 ?????????量取41.5ml浓盐酸加入去离子水定容到1000 ml 配液2：8％氯化钠溶液 ???????? 称取80.0g氯化钠，加1000ml去离子水溶解混匀 配液3：提取液 ???????配液1：配液2=1：4比例混合 配液4：1M氢氧化钠溶液 ??????? 称取20.0g氢氧化钠 1．?? 称2±0.05 g**放入15ml的离心管中，加入6 mL 提取液，充分摇匀后放置5-10 min； 2．?? 室温4000 r/min 以上离心5 min； 3．?? 移取1ml 上清液到2ml离心管中，加入45μL配液4溶液，混匀，调整PH值7-8。 4.? 取50μL下层进行分析。 样本稀释倍数：4 ? 饲料（稀释倍数10） 1．用研钵研碎饲料，称1 g研碎的饲料样品加入10 mL 0.01 M的盐酸，充分混合5 min。2．检查pH值是否在6.5-8之间，否则用氢氧化钠或盐酸调节。 3．3500 rpm离心5 min，转移出上清液（如上清液仍然浑浊可提高转速或用滤纸过滤）。4．吸取50μL进行检测。 ? ? 五、操作步骤 1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。 3． 加标准品/样本50 μL /孔，然后加入抗体工作液50 μL /孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，37 ℃反应30 min。 4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。 5．加入酶标记物100 μL /孔，用封板膜盖板，37 ℃反应20 min。 6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。 7． 显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL，轻轻振荡混匀，37 ℃环境避光显色10 min。 8． 测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。 ? 六、结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标，以沙丁胺醇标准品浓度（ng/mL）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中沙丁醇实际浓度。 ? 七、注意事项 1. 终止液为2 M**，避免接触皮肤。 2. 不要使用已过有效日期的孔雀石绿检测试剂盒；不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。 3. 0标准液的A450nm<0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。 4. 显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。 ? 八、储藏条件和保质期 储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒