一、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的苏丹红和微孔条上预包被的偶联抗原竞争苏丹红抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物苏丹红的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应苏丹红的含量。 ? 二、试剂盒技术指标 试剂盒灵敏度：???????? 0.4ppb 样本定量检测下限 水基质（番茄酱、坛坛乡）?? 0.4ppb 油基质（辣椒油，辣椒酱） ? 0.4ppb 粉末状（辣椒粉）????????  1.0ppb 交叉反应率 苏丹1号 ……………………………………………… 100％ 苏丹2号 ……………………………………………… ＜1％ 苏丹4号 ……………………………………………… ＜1％ 对位红 ………………………………………………… 120％ 样本回收率 水基质 ……………………………………………… 75±10％ 油基质 ……………………………………………… 50±10％ 粉末状 ……………………………………………… 65±10％ ? 三、?试剂盒组成 1、微量测试孔：96T 2、 标准品液：（1ml/瓶） 0ppb、0.4ppb、3.2ppb、6.4ppb、12.8ppb、25.6ppb 3、 酶标记物?? ?????? 12ml 4、 抗体工作液??????? 7ml 5、 底物缓冲液破????? 7ml 6、 底物液??????????? 7ml 7、 终止液??????????? 7ml 8、 20倍浓缩洗涤液?? 50ml 9、1mg/ml标准品液：（0.2ml） ? 四、样本处理 取1g样品（辣椒面、辣椒油、辣椒酱、番茄酱），加入3 mL**溶液，超声震荡20 min，涡旋混合0.5 min，静置10 min， 3000 r/min离心分离10 min，取上清100 μL用PBST稀释10倍至1 mL，取50 μL进行ELISA测定。 ? 五、操作步骤 1. 将试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温（20～26℃）下平衡30min以上，将需用的条板固定于支架，按顺序编号； 2. 洗液配制：将50 mL浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水稀释至1000 mL备用。（或按需量稀释） 3. 标准品的配制：先将试剂盒中的1 mg/mL苏丹红标准品用洗液稀释1000倍，变成1000ng/mL，再用洗液将1000 ng/mL的标准品分别稀释成0.4 ng/mL， 3.2 ng/mL，6.4 ng/mL，12.8 ng/mL，25.6 ng/mL。（现配现用） 4. 在标准品孔中加入50 μL标准品，样品孔加入50 μL待测样品，然后每孔加入50 μL抗体（加入标品和样品时无时间差的影响），轻拍混匀，37℃下孵育30min； 5. 倒出孔中的液体，以试剂盒浓缩洗液稀释20倍后作为洗液，用洗板机洗涤4～6遍；没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中，静置20 s，倒出孔中的液体，将微孔架倒置，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作4～6遍； 6. 每孔加入酶标记物100 μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min ，取出重复洗板步骤。 7. 显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL．轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，置37℃ 环境中反应10 min。 8. 测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡混匀．设定酶标仪于450 nm处（建议用双波长450/630 nm 检测，在20 min内读完数据），测定每孔OD 值，根据标准曲线计算样品浓度。 ? 标准样品配制方法： （1）准备5个1 mL瓶子，其中一个加入1000 μL洗液，一个加入700 μL洗液，其余的分别加入500 μL洗液。 （2）在1000 μL洗液瓶子中先吸出25.6 μL的洗液，然后加入25.6 μL的1000 ng/mL标准品，混匀，使其浓度为25.6 ng/mL，作好记号； （3）再从25.6 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中，使其浓度为12.8 ng/mL，混匀，作好记号； （4）再从12.8 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中，使其浓度为6.4 ng/mL，混匀，作好记号； （5）再从6.4 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中，使其浓度为3.2 ng/mL，混匀，作好记号； （6）再从3.2 ng/mL的瓶子中吸出100 μL加入其中一个700 μL洗液的瓶子中，使其浓度为0.4 ng/mL，混匀，作好记号。 （加样前应将标准品充分混匀，配好后在半小时内使用） ? 七、?结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标，以苏丹红标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中苏丹红实际浓度。 ? 八、?注意事项 1．室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。 2．洗板拍干后应立即进行下一步操作。 3．混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。 4．反应终止液为2M**，避免接触皮肤。 5．将不用的微孔板放进自封袋重新密封 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 6．不要使用过了有效日期的试剂盒，不要使用不同批号试剂盒中的试剂。 7．显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之，0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。 8．该试剂盒比较好反应温度为25 ℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。 ? 九、储藏条件和保质期 储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。